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冷柜在重組磷脂酶C的改性應用
yb-liock / 2020-06-30

 

 
1、修飾劑SSmPEG的制備:向燒瓶中加入2g分子量為5000的單甲氧基聚乙二醇mPEG,再加入4mLN,N二甲基甲酰胺,充分溶解;隨后加入0.12g丁二酸酐,密封混勻,于100℃邊攪拌邊加熱3h;
 
待反應物冷卻后于層析冷柜中逐滴加入10mL乙醚,將所得沉淀過濾干燥;
 
 
干燥后的沉淀用二氯甲烷復溶,再用乙醚沉淀,重復四次;所得沉淀產物真空干燥,在干燥器中保存備用;將上述終產物溶于4mL N,N二甲基甲酰胺,加入0.46g N羥基琥珀酰亞胺和0.825g二環己基碳二亞胺,30℃溶解過夜,將反應產物置于層析冷柜中冷卻至0℃,逐滴加入40mL乙醚,將所得沉淀過濾干燥;
 
干燥后的沉淀用二氯甲烷復溶,再用乙醚沉淀,重復四次;
 
終沉淀產物即為活化的聚乙二醇,將其干燥,備用;

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2、修飾酶的制備:將SSmPEG和磷脂酶C按0~30的摩爾比例溶解于體積為10mL,pH為7.2,濃度為25mM的TrisHCl緩沖液中,在室溫下震蕩反應一定時間,用透析袋4℃透析過夜,所得的修飾酶液冷凍干燥后備用。
 
 
 
 
 

 

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